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發(fā)布日期：2022-02-25 來源：GM
1.服務(wù)介紹
慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的慢病毒siRNA/miRNA載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時表達載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比，一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細胞系。并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩(wěn)定表達。
2. 實驗結(jié)果展示
293T包裝前(200X) :
293T包裝后白光視野72h(200X):
293T包裝后熒光視野72h(200X):
HCT116穩(wěn)定細胞株 白光視野（200x）:
HCT116穩(wěn)定細胞株 熒光視野（200x）:
3.實驗流程
接種293T細胞——培養(yǎng)12h，密度90%，病毒包裝——6h換液——72h后，病毒收集，-80℃凍存——目的細胞鋪板，病毒感染——24h-72h后根據(jù)觀察熒光加嘌呤篩選——得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，擴大培養(yǎng)，待后續(xù)實驗。
4.注意事項
（1）適度消化：消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細胞的形態(tài)變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化；
（2）細胞鋪板密度至關(guān)重要，一般來說，當細胞密度達到90%～100%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的包裝效率，過低會影響轉(zhuǎn)染效果；
（3）病毒轉(zhuǎn)染后，可以通過顯微鏡下觀察熒光或者空斑的形成來初步判斷病毒是否包裝成功。
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